實驗目的

明暗箱實驗（Light-Dark Box Test）通過模擬自然環境中光線強弱對比，觀察小鼠在趨暗本能與探索行為之間的沖突，定量評估其焦慮水平及情緒狀態變化。實驗結果可應用于焦慮樣行為機制研究、藥wu抗焦慮效果評價及神經精神疾模型驗證。

實驗設備與環境參數

1. 箱體結構
• 尺寸：明箱區（18cm×18cm×25cm）與暗箱區（12cm×18cm×25cm），通過7cm×7cm通道連接。
• 材質：醫用級ABS材料，明箱頂部配置30W可調白光LED光源（0-1200 lux），暗箱配備30W紅色LED燈（波長620-750nm，底部照度≤2 lux）。
• 監控：紅外攝像系統（850nm濾鏡，采樣頻率30fps），配套行為分析軟件（如EthoVision XT）。
2. 環境控制
• 光照周期：晝夜節律實驗需嚴格區分白天（18:00-6:00）與黑夜（6:00-18:00）。
• 溫濕度：室溫（22±2）℃，濕度40%-60%。
• 噪音控制：實驗室背景噪音≤60分貝，避免突發聲響干擾。

實驗前準備

1. 動物適應
• 選用6-8周齡、體重22±2g的SPF級昆明小鼠，雄性，單籠飼養1周后隨機分組。
• 實驗前24小時禁食（可選），預適應測試環境：將小鼠置于行為測試室至少30分鐘。
2. 設備校準
• 光照強度驗證：明箱區照度設為400 lux（白天）或15W（黑夜），暗箱區恒定2 lux。
• 清潔消du：75%乙醇擦拭箱體，去除氣味殘留。

實驗操作流程

1. 動物放置
• 將小鼠輕柔置于暗箱中央，頭部朝向通道，關閉通道門。
• 開啟攝像系統，實驗人員退出房間。
2. 行為記錄
• 明箱停留時間百分比（Ltime%）
  ：正常范圍20%-40%，低于15%提示高度焦慮。
• 穿梭次數（Transition）
  ：正常值5-15次/5分鐘，焦慮小鼠≤3次。
• 首ci進入明箱潛伏期（Latency）
  ：正常值10-30秒，超過60秒為焦慮表型。
• 測試時長：5分鐘（標準流程）或10分鐘（延長觀察）。
• 核心指標：
• 輔助指標：總運動距離（600-1000 cm/5分鐘）、站立次數（3-8次）、糞便粒數（1-3粒）。
3. 終止與清潔
• 時間截止后，輕柔取出小鼠放回飼養籠。
• 用75%乙醇徹底清潔箱體，干燥后進行下一只測試。

數據分析與結果解讀

1. 基礎分析
• 計算Ltime%、穿梭次數、潛伏期等參數，對比對照組與實驗組差異。
• 抗焦慮藥wu（如地xi泮1mg/kg）可顯著增加Ltime%（提升30%-50%）及穿梭次數（增加40%-60%）。
2. 高ji分析
• 運動特征：總路程、平均速度（8-12 cm/s）、加速度。
• 焦慮相關行為：僵直時間（>2秒）、過度理毛次數（>5次）。
3. 多因素交互作用
• 晝夜節律與光照面積：白天使用大面積箱體（3/5明箱）時，焦慮行為更顯著（Ltime%下降15%-20%）。
• 光照強度：40W為zui佳刺激閾值，低于15W或高于100W均導致行為抑制（穿梭次數下降30%-40%）。

質量控制

1. 操作規范
• 實驗間隔期徹底清潔箱體，避免氣味干擾。
• 采用雙盲法進行數據采集，減少主觀偏差。

注意事項

• 小鼠四爪全部通過通道方可記錄為一次穿梭。
• 暗箱區光照顏色需恒定（紅色zui佳），避免使用小鼠敏感波長（如藍光470nm）。
• 數據分析需結合運動總距離，排除體力差異對焦慮指標的影響。

行為學實驗方法根據實驗人員需求調整設計，上述方案僅做參考。

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