1. 如果動物不動或行動得很慢,有很多可能的原因和解決方法。對于獎賞交替,首先檢查飼養(yǎng)籠里是否有未吃完的食物,也許是因為它們吃得太多了,導致試驗時動機不足,但*可能的原因是適應不到位。在適應步驟時,要確保所有動物能夠立即鎖定放在飼養(yǎng)籠里的食物,之后,在其他逐漸接近測試場景的裝置中重復這一步驟,或者在迷宮地板上放置一層薄薄的飼養(yǎng)籠的墊料,以減少焦慮。睡覺或不合作的動物,通常可以通過在飼養(yǎng)籠里給予少量獎賞來“啟動”它們,從而誘導它們行動。拿一個裝滿牛奶的注射器,給每只小鼠擠出幾滴,它們會從注射器的末端舔舔它。對于大鼠,放一些獎賞食丸。當然,如果主要實驗(而不是預訓練)正在進行,則必須對對照組和實驗組給予同等的激勵手段。此外,實驗者可能特別感興趣的是感覺運動或動機過程是否受到了處理因素的影響,在這種情況下,“補救措施”顯然是不合適的。
2. 還可能出現(xiàn)的問題是在一系列試驗中,動物的速度越來越慢,在某個時刻,它們就停止探索迷宮了。通常,一次測試(session)包括10次試驗(1個采樣試驗加9個測試試驗),*多可以重復進行3次。超過3次重復測試,就會有越來越多的小鼠開始超過時間限制,通常無法恢復,并且不得不被排除在實驗之外。在實驗設計時,*好設計不超過3次測試。如果需要4次或更多的實驗,應考慮更大的樣本量,以彌補實驗對象的潛在損失(可以相對于期望的終樣本量增加40-50%)。然而,在某些情況下,一些動物也可能在前三次測試就表現(xiàn)出高潛伏期。在這種情況下,聽覺或觸覺刺激可以用來促進動物沿著迷宮運動。需要強調的是,如果選擇了這一解決方式,就必須采用一個好的標準,所有組的所有動物都必須使用相同的標準進行測試。若動物不動,建議的標準是:在80 s 時,使用聲音刺激(從動物身體中心上方約30厘米處打響指3次,不要從左側或右側發(fā)出聲音,否則會產(chǎn)生空間偏倚);100 s時,用長棉簽的棉端輕輕撫摸動物的背部中心三次,在120、140和160 s時,重復如上所述的觸覺刺激。如果動物在聽覺和觸覺刺激下仍超過了時間限制,將其放回籠子,至少30 min后再次測試。必須謹慎地進行充分的刺激,避免給動物帶來壓力。觸覺刺激應該只是非常輕地觸摸動物的皮毛,不要以任何方式刺、推或傷害它。聽覺刺激也應該是一種柔和的聲音而不應過分刺耳。一些研究人員不喜歡使用額外的聽覺或觸覺線索。有三種選擇,一是不使用聽覺/觸覺刺激;二是只用于那些超時的動物;三是默認應用于所有動物。我們的建議是,只有在十分必要的時候才采用額外的刺激,即在大量超時的實驗中,只在超時的動物上應用。無論選擇這三種選擇的哪一個,都必須在所有實驗中保持不變。
3. 動物放入迷宮中起始臂遠端,背向目標臂,但試驗開始后動物并不轉身。這表明動物可能生病、嗜睡或很老了。輕輕地手動幫助動物轉身。如果它開始沿著起始臂移動,就讓它自由地探索迷宮。如果動物保持靜止,輕輕地手動引導它沿著起始臂和兩個目標臂中的一個移動。重復這個過程*多三次,直到動物自發(fā)地轉身并沿著迷宮移動。如果動物可以自發(fā)探索了,那么就開始測試。如果三次以后動物仍然靜止不動,就把它從迷宮中拿出來放回籠子里,幾個小時后重新測試。
4. T迷宮有許多與其他開放迷宮或高架迷宮相同的問題,即對迷宮或實驗者的恐懼,以及它探索和尋找迷宮中食物的動機水平。當動物對迷宮或實驗者的應激恐懼超過其對探索和覓食的動機時,動物對迷宮的探索減少,甚至一直呆在迷宮某處不動。這種恐懼通常表現(xiàn)為在迷宮中排便和排尿。當它被拿起時也會尖叫。因此,足夠的適應是必要的,動物的動機水平可能也需要得到解決。否則,如果動物沒有在迷宮中做出選擇,就無從得知它的記憶能力是正常的還是受損的。
5. 如果在試驗中沒有提供**數(shù)量的獎賞,動物可能會遭受“對比效應”。這指的是,如果收到的獎賞低于預期,那么動機就會降低。曾有研究者在試驗后期沒有了足夠的煉乳,所以稀釋的比例超過了建議的1:1,結果導致小鼠在后面的試驗都沒有離開迷宮的起始臂。然而,如果動物一直被習慣于獎賞數(shù)量在一定范圍內的可變性,它們的表現(xiàn)就不太會受到影響。
6. 對照組動物表現(xiàn)出強烈的單側偏好。如果健康的大/小鼠表現(xiàn)出強烈的轉向左或者右的傾向,那么可能是這一側有吸引力,或者,另一側可能有厭惡因素。例如,如果對雄性小鼠進行測試,在迷宮左側臂放一個裝有雌性小鼠的開放籠子,可以觀察到一種強烈的向左轉向的傾向。另一方面,如果迷宮上的照明不均勻,一側臂比另一側更亮,那這一側對大/小鼠來說是厭惡的,因此總是會避免進入明亮的臂。
7. 若動物會舔迷宮,而不是去探索,那么需要檢查是否使用了一種帶有水果香味的洗滌溶液來清洗迷宮。如果有,用水濕的紙巾將溶液從迷宮中去除,然后用30%乙醇浸泡的紙巾消除任何殘留的氣味。
8. 大/小鼠傾向于跳出迷宮的這種情況并不常見,但它可能發(fā)生在一些幼年動物或接受基因突變、藥理學操作和導致過度活躍的大腦損毀的動物中。可以用透明擋板覆蓋迷宮,或者,增加迷宮側壁的高度,50厘米應該足以防止跳躍逃脫。
9. 運動受損的動物沿著起始臂緩慢移動,到達目標臂時超過了時間限制。解決方法可以是改變一下起始位置。在每次試驗開始時,將動物放置在起始臂的中心位置,而不要放在遠端,就在選擇區(qū)之前。所有實驗組,包括對照組,都必須使用相同的起始位置。
10. 對照組動物表現(xiàn)出隨機水平的交替,這在健康的成年大/小鼠中并不常見。確保在測試期間,實驗室內沒有聽覺、視覺或嗅覺的干擾。確認飼養(yǎng)條件是否有規(guī)律,是否沒有壓力。確保測試前**或測試當天飼養(yǎng)籠沒有改變(實驗前不要換墊料),確保在前幾天動物沒有經(jīng)歷壓力操作(如麻醉),手術后至少恢復5天再進行行為測試。
11. 若大/小鼠在迷宮中會排出大量的尿液和糞便,這是動物焦慮的跡象。房間里的什么東西可能會影響了這些動物。盡量保證實驗室處在昏暗的光線條件下,而不是在標準照明下,因為嚙齒動物天生恐光,明亮的光線會產(chǎn)生焦慮。還要確認沒有可以嚇到動物的噪音。
12. 若大/小鼠后腿直立,嗅探空氣,而不沿著迷宮移動,那么需要檢查實驗室里的嗅覺刺激是否分散了動物的注意力(例如,如果之前進行過采血,但沒有清理干凈),確認后消除嗅覺干擾。
13. 動物跑得太快了,要人工及時記錄下所有的結果是很困難的,尤其是選擇潛伏期。*好是使用自動記錄系統(tǒng),比如VisuTrack動物行為分析系統(tǒng)(上海欣軟)。
如果您也對動物實驗感興趣,歡迎關注和推薦關注知乎帳號:知鼠達理和微信公眾號:BrainTalks, 腦聲常談,專注于動物神經(jīng)科學與行為學的實驗知識的方法傳播與分享交流,您可以推薦給您身邊的朋友、同學以及老師,我們會定期更新您需要的相關實驗方法的視頻和文章,希望能對大家?guī)韼椭?
對實驗設備有興趣的小伙伴可以聯(lián)系知鼠達理の劉工13262879783