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高架十 字迷宮與針刺zhi療大鼠酒精戒斷焦慮征的作用機(jī)制

摘要:目的:觀察針刺對(duì)大鼠酒精戒斷焦慮樣癥狀的zhi療作用,探究針刺zhi療大鼠酒精戒斷焦慮樣癥 狀的作用機(jī)制。方法:選取健康的SD大鼠,隨機(jī)分組,分為空白組、模型組、三陰交組、足三里組、電針 兩穴三陰交+足三里)組、針刺兩穴陰交+足三里)組,連續(xù)腹腔注射酒精(ethanol,Eth) 28 d,制備酒 精成癮模型,撤酒精3 d,制備酒精戒斷模型,撤酒精期間分別針刺相應(yīng)穴位進(jìn)行zhi療,針刺3 d,高架十 字迷宮(EPM)測(cè)其焦慮行為,ELISA測(cè)海馬中促腎上腺皮質(zhì)ji素釋放ji素、環(huán)磷酸腺苷濃度。結(jié)果:與 空白組比較,酒精戒斷大鼠停留在開放臂的次數(shù)和時(shí)間明顯減少(P<〇.〇5),海馬中cAMP、CRH的濃度 明顯升高(P<〇. 01);與模型組相比較,電針兩穴組和針刺兩穴組在EPM開放臂的的停留次數(shù)、時(shí)間明 顯地增加(P<〇.〇5),海馬中cAMP、CRH的濃度明顯降低(P<0.01),而單穴位組對(duì)各檢測(cè)指標(biāo)的作用效 果不明顯(P>0.05)$結(jié)論:針刺能緩解酒精戒斷焦慮征大鼠的焦慮,其抗焦慮的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié) 大鼠腦內(nèi)海馬組織中cAMP-CRH相互作用有關(guān)。

關(guān)鍵詞:針刺;焦慮;酒精戒斷;促腎上腺皮質(zhì)ji素釋放ji素;環(huán)磷酸腺苷


實(shí)驗(yàn)儀器

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行為學(xué)指標(biāo)測(cè)試

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)光線昏暗并保持恒亮,室溫24°C,保持 安靜。將每只大鼠置于高空十字架(EPM)的正中央 釋放,每只大鼠測(cè)試時(shí)間為5 min。每一只動(dòng)物完成測(cè) 試后,清理糞便,并對(duì)裝置用酒精進(jìn)行徹底清潔消du。

測(cè)試指標(biāo):進(jìn)入到開放臂次數(shù)0E):即進(jìn)入到任 ¥開放臂的次數(shù),以大鼠4個(gè)爪均進(jìn)入到臂內(nèi)開始,中 途有1個(gè)爪從該臂中完全撤出,視為該次進(jìn)入活動(dòng)完 成;進(jìn)入到開放臂時(shí)間0T):進(jìn)入到開放臂停留的時(shí) 間,單位:秒U(xiǎn));進(jìn)入到閉合臂次數(shù)(CE):即進(jìn)入到任 一閉合臂的次數(shù),以大鼠4個(gè)爪均進(jìn)入到臂內(nèi)開始,中 途有1個(gè)爪從該臂中完全撤出,視為該次進(jìn)入活動(dòng)完 成;進(jìn)入到閉合臂時(shí)間(CT),進(jìn)入到閉合臂停留的時(shí) 間,單位:秒(s)。由以上指標(biāo)分別計(jì)算出:①進(jìn)開放 臂次數(shù)比例〇E% = OE“OE+CE) xl〇〇%;②開放臂停 留時(shí)間 t匕例 〇T% = OIV(OT+CT) xl〇〇%


討論

焦慮征大多是因?yàn)榕K腑功能失調(diào)、氣機(jī)失常而導(dǎo) 致神志不安,足M里是足陽明胃經(jīng)合穴,f陰交是肝、 腎、脾經(jīng)的交會(huì)穴,這兩個(gè)穴位既能調(diào)節(jié)所屬臟腑的經(jīng) 氣,同時(shí)又針對(duì)了焦慮征的病理特點(diǎn)進(jìn)行zhi療。近年 來,三陰交、足S里作為zhi療焦慮征的主要穴位,受到 廣大學(xué)者的關(guān)注。有實(shí)驗(yàn)證明,電針三陰交可緩解自 然更年期大鼠的焦慮行為[6],針刺足三里可減輕海洛 因戒斷后所產(chǎn)生的焦慮癥狀,且療效穩(wěn)定[7]。本實(shí)驗(yàn) 中,我們選取了$陰交和足三里進(jìn)行針刺zhi療,觀察到 通過同時(shí)針刺這兩個(gè)穴位可明顯緩解酒精戒斷所產(chǎn)生 的焦慮癥狀,由此我們猜測(cè)針刺這兩個(gè)穴位可能存在 相互作用而使zhi療效果得到加強(qiáng)。單穴位的zhi療效果 并未如相關(guān)文獻(xiàn)中所了解的那么顯著,這可能是由于 針刺的天數(shù)和時(shí)長(zhǎng)不同所導(dǎo)致。電針療法是應(yīng)用電針 儀輸出脈沖電流,通過毫針作用于經(jīng)絡(luò)穴位以達(dá)到治 療ji病目的的一種方法,它將毫針的刺激和電生理的 效應(yīng)相結(jié)合,這種方法不僅可以提高針刺的zhi療效果, 同時(shí)還增加了針刺的zhi療范圍,加強(qiáng)了針刺疏通經(jīng)絡(luò) 的作用[8]。有文獻(xiàn)報(bào)道[9],電針zhi療焦慮征的效果與 抗焦慮藥wu的zhi療效果相當(dāng),且避免了藥wu所帶來的 依賴性等副作用。在本研究中,多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí) 了電針療法較普通針刺確有更好的療效。

大量的研究結(jié)果顯示,當(dāng)機(jī)體受到內(nèi)外環(huán)境的刺 激時(shí),應(yīng)激反應(yīng)會(huì)表現(xiàn)出一系列的神經(jīng)***物質(zhì)的 變化,主要表現(xiàn)為HPA軸的興奮。下丘腦室旁核是 HPA-神經(jīng)***軸的中qu位點(diǎn),CRH則是HPA軸激 活的關(guān)鍵性物質(zhì)。適量的CRH的增多可使機(jī)體處于 興奮的狀態(tài),但CRH的含量過高時(shí),則可引起適應(yīng)性 的機(jī)制障礙,進(jìn)而引發(fā)多種癥狀的發(fā)生,其中包括焦 慮、抑郁等。有研究表明,在應(yīng)激刺激下,CRH的濃度 以及CRH mRNA的表達(dá)均顯著增加[1()]。在焦慮癥狀 中所觀察到的ji素含量的變化主要是由CRH的過度 分泌所導(dǎo)致[11]。新近研究表明,CRH的受體拮抗劑 可作為抗焦慮以及抗抑郁的神經(jīng)藥理學(xué)zhi療方法[12] 由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們也觀察到,酒精戒斷焦慮征大鼠的 海馬中CRH的濃度較空白組大鼠均増加,經(jīng)針刺zhi
后,其數(shù)值又下降至正常水平,由此證實(shí)了,CRH在焦 慮的發(fā)生中占有重要的地位。

焦慮征受多種基因和多種環(huán)境因素的調(diào)控,目前 發(fā)現(xiàn)其可能通過一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行調(diào) 控。有研究表明,與G蛋白相偶聯(lián)的cAMP信號(hào)傳導(dǎo) 通路的異常與焦慮密切相關(guān),這一論證從我們的實(shí)驗(yàn) 結(jié)果中得到了證實(shí),酒精戒斷大鼠的cAMP的濃度升 高,針刺zhi療后得到緩解。cAMP是體內(nèi)比較重要的 **信使,它對(duì)多種神經(jīng)遞質(zhì)的功能發(fā)揮起調(diào)節(jié)作用。 近年來,有大量的研究結(jié)果證實(shí),cAMP依賴的PKA 信號(hào)通路在酒精依賴的形成過程中具有重要的作用。 環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)作為PKA重要 的下游信號(hào)蛋白,在藥wu的成癮中也起著尤為重要的 作用,因此,近年,CREB在酒精成癮的相關(guān)研究中成 為又一備受關(guān)注的研究熱點(diǎn)。CREB通過結(jié)合cAMP 效應(yīng)元件(CRE)調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄,CRE是在各種基因 調(diào)節(jié)區(qū)域中的順式增強(qiáng)子,CRH基因的上游調(diào)節(jié)區(qū)中 存在CRE序列,而且已經(jīng)證實(shí),CRE的功能與CRH 轉(zhuǎn)錄活性密切相關(guān),由此為我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供證據(jù): 針刺抗焦慮的作用可能通過調(diào)節(jié)cAMP-CRH相互作 用,終使酒精戒斷焦慮征得到緩解。同時(shí)由本實(shí)驗(yàn)結(jié) 果證實(shí)了 cAMP、CRH之間可能確存在某種聯(lián)系,共同 調(diào)節(jié)酒精戒斷焦慮征的發(fā)生。

綜上所述,本實(shí)驗(yàn)探究了針刺可緩解酒精戒斷期 間的焦慮樣行為,初步證實(shí)針刺可能通過cAMP-CRH 相互作用來緩解酒精戒斷焦慮樣癥狀,為針刺療法開 發(fā)成為防治酒精復(fù)飲的有效zhi療手段提供實(shí)驗(yàn)和理論 依據(jù),也為綜合利用中醫(yī)療法zhi療其他毒品成癮提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)支持。



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