腸易激綜合征( Irritable bowel syndrome，IBS) 是臨床上常見的一種功能性腸道疾，常以腹tong、腹瀉、bian等為主要臨床表現。我國發病率約為1% ～ 16%。腹瀉型腸易激綜合征 ( Diarrhea －predominant irritable bowel syndrome，IBS － D) 是 IBS*常見的亞型，占 IBS 23． 3% ～ 65． 0%，以反復腹瀉、腹tong發作為主要臨床表現，常伴焦慮、抑郁等精神心理異常。研究發現，IBS 發病多與胃腸道動力異常以及內臟感覺高敏感性有關。魏瑋教授臨床用溫腎健脾法zhi療 IBS － D 患者臨床療效甚佳，溫腎健脾法對腹瀉型腸易激綜合征大鼠 內臟敏感性和曠場實驗的影響通過觀察溫腎健脾法對 IBS － D 大鼠內臟敏感性及曠場實驗的影響，探索溫腎健脾法zhi療 IBS － D 的療效和作用機制，為溫腎健脾法在臨床的推廣應用提供實驗依據。
1 材料與方法
1． 1 實驗材料
1． 1． 1 實驗動物 28 只 SD 大鼠乳鼠及 SD 大鼠母鼠購自湖北省實驗動物研究中心。等級: SPF 級，動物批號: 42000600023620，實驗動物使用許可證號:SYXK( 鄂) 2013 － 0069。
1． 1． 2 實驗要務 番瀉葉，要務購于中國中醫科學院望京醫院; 溫腎健脾方由肉豆蔻 15 g，補骨脂 30g，五味子 9 g，吳茱萸 9 g，黨參 30 g，白術 15 g，郁金18 g，生姜 10 g，大棗 10 g 組成 。要務購于中國中醫科學院望京醫院。匹維溴銨，購于北京萬生藥業有限責任公司，國藥準字 H20133036。
1． 1． 3 試劑與儀器 球囊導管: 廣州維力醫療器械股份有限公司( 8FＲ) ; 曠場實驗箱: 上海欣軟( XＲ －XZ301) ; YP402N 電子天平( 上海菁海儀器有限公司) ; AHB － 2 － LB 萬能照相機( Olympus 公司) 。
1． 2 實驗方法
1． 2． 1 分組與給藥 參照課題組前期造模方法造模 。28 只剛出生乳鼠隨機分為 4 組，每組 7 只，并與 1 只母鼠同籠飼養。模型組( Model 組) 、溫腎健脾方組( WSJP 組) 及匹維溴銨組( Pinaverium bromide 組) 乳鼠于出生后第 2 天 ～ 第 21 天每天上午9: 00 － 12: 00 與母鼠分離 3 h，正常組( Normal 組) 不予干預。第 22 天斷奶，予常規自由飲食。第 30 天起模型組、溫腎健脾方組及匹維溴銨組以 1． 0 g /ml番瀉葉水煎液灌胃( 10 ml / kg) ，1 次/ d。同時溫腎健脾 方 組 將 中 藥 定 量 加 水 400 ml，煎 煮 濃 縮 至200 ml，按 10 ml / kg 灌胃給藥，2 次/ d( 大鼠用藥劑量= 人體用藥劑量 × KB/KA，KB = 0． 71，KA = 0． 11) 。匹維 溴 銨 片 碾 碎 后 溶 于 蒸 餾 水 配 制 成 濃 度 為1． 5 mg /ml混懸液，按15 mg /( kg·d) 劑量灌胃給藥，2 次/ d( 即匹維溴銨組灌胃劑量為30 mg/( kg·d) 。溫腎健脾法對腹瀉型腸易激綜合征大鼠 內臟敏感性和曠場實驗的影響正常組、模型組以相同體積生理鹽水灌胃，連續 4 周。
1． 2． 2 觀察指標
1． 2． 2． 1 一般情況 觀察大鼠的精神狀態、體質量、活動情況、毛發光澤度、食欲、大便性狀等。
1． 2． 2． 2 腹壁撤退反射 造模后大鼠在實驗前24 h禁食不禁水，輕觸其門部位使其排盡大便。
在大鼠輕度麻醉狀態下從門緩慢插入未充氣且涂石蠟油的后帶球囊的導管，球囊末端距門約1 cm，在門外1 cm 處將其固定在大鼠尾根部。每只大鼠給予球囊擴張 3 次，容量分別為 1． 0、1． 5、2． 0 ml，每次擴張持續 30 s。每次 4 min，每只重復 3 次，每組 7 只大鼠 AWＲ 評分( 表 1) 取平均值進行統計分析。
表 1 AWＲ 評分標準
評分 大鼠腹壁撤退反射0 給予結直腸擴張刺激時大鼠情緒基本穩定1 給予刺激時變得不穩定，偶爾扭動頭部2 腹背部肌肉輕微收縮但腹部未抬離地面
3 腹背部肌肉較強烈收縮并把腹部抬離地面4 腹部肌肉強烈收縮，腹部呈弓形并把腹部、會**抬離地面
1． 2． 2． 3 曠場實驗 曠場實驗( 上海欣軟 XＲ －XZ301) 所用實驗箱為高 30 ～ 40 cm，底邊長為 100cm 的曠場，周壁的顏色為黑色，曠場底面被平均分為 25 個 4 cm × 4 cm 的小方格。正上方架攝像頭，視野覆蓋整個曠場。將大鼠放置在正中央格，同時進行攝像和計時，時間為 5 min。通過計算機示蹤分析系統來分析大鼠在一定時間內的活動狀態。實驗室要保持安靜，室溫為 20 ℃ 左右，光線充足。觀察指標: 方格間穿行次數( 動物的四肢從一個格進入另一個格為穿行一次) 、直立次數( 動物雙前肢同時離地，或者雙前肢放在墻壁尚算作直立一次) 、中央格停留時間、穿越中央格的次數。溫腎健脾法對腹瀉型腸易激綜合征大鼠 內臟敏感性和曠場實驗的影響
型號：XR-XZ301，配套軟件為SuperMaze動物行為分析軟件
1． 3 統計學方法
采用 SPSS16． 0 統計軟件進行數據分析，所有數據以均值 ± 標準差( x ± s) 表示，不同組間兩兩比較采用單因素方差分析( One － way ANOVA) 中 LSD 法( *小顯著性法) ，P ＜ 0． 05 為差異有統計學意義。
2 結 果
2． 1 各組大鼠一般狀態觀察
正常組: 大鼠精神狀態良好，活動性積極，糞便呈顆粒狀。毛發色白、光澤度良好。進食及飲水量正常。模型組: 大鼠精神狀態萎靡，活動積極性明顯減弱，出現困乏狀態。糞便稀薄不成形。毛發色澤略微發黃，缺少光澤度。飲水量增加而進食量減少。溫腎健脾方組: 大鼠精神狀態有一定程度的恢復，活動積極性提高。糞便在zhi療 1 周結束后由稀薄不成形轉為半干型及顆粒狀。毛發光澤度和進食量有所提高。匹維溴銨組: 大鼠精神狀態有一定程度的恢復，困乏現象基本消失，活動積極性提高。糞便在zhi療 5 天后逐漸轉為半干型及顆粒狀。毛發光澤度和進食量有所提高。
2． 2 大鼠體質量變化監測
隨著時間延長，各組大鼠體質量都有一定程度的增加。在同一時間點，模型組相較于正常組的體質量顯著降低; 匹維溴銨組和溫腎健脾方組與模型組比較，大鼠體質量顯著增加; 匹維溴銨組與溫腎健脾方組體質量比較差異無統計學意義。
圖 1 各組大鼠體質量變化
2． 2 腹壁撤退反射( AWＲ 評分)
在擴張體積為 1． 0 ml 時，與正常組比較，模型組 AWＲ 評分顯著升高( P ＜ 0． 01) ; 與模型組比較，匹維溴銨組 AWＲ 評分顯著降低( P ＜ 0． 01) ; 與模型組比較，溫腎健脾方組 AWＲ 評分有所降低，但差異無統計學意義。在擴張體積為 1． 5 ml 和 2． 0 ml 時，與正常組比較，模型組 AWＲ 評分顯著升高( P ＜0． 01) ，與模型組比較，匹維溴銨組和溫腎健脾方組AWＲ 評分顯著降低( P ＜ 0． 01) 。
2． 3 曠場實驗
與正常組比較，模型組大鼠直立次數、方格間穿行次數、穿越中央格次數、中央格停留時間均顯著降低( P ＜ 0． 01) 。與模型組相比，溫腎健脾方組與匹維溴銨組直立次數、方格間穿行次數、穿越中央格次數、中央格停留時間顯著升高( P ＜ 0． 01) 。匹維溴銨組與溫腎健脾方組直立次數、方格間穿行次數、穿越中央格次數、中央格停留時間比較差異無統計學意義。
3 討 論
IBS － D 的病因復雜，發病機制尚未完全闡明，大量的研究表明早期不佳生活事件和精神**與IBS 的發病關系密切。本研究造模方法以團隊前期研究的造模方法為基礎，予番瀉葉灌胃聯合母嬰分離，即采用物理化學刺激共同作用的方法制備內臟高敏并脾腎陽虛型 IBS － D 大鼠模型－。魏瑋教授的溫腎健脾方是在四神丸基礎上加入黨參、白術、郁金組成，功效為溫補脾腎、澀腸止瀉。前期研究顯示，該方可有效改善 IBS － D 大鼠腹瀉、倦怠蜷臥、飲食減少、體重下降等一般狀況，提示其可用于脾腎陽虛型 IBS － D 大鼠模型的要務反證。目前評價內臟高敏模型是否成功的方法主要有腹外斜肌放電和腹壁撤退反射評分。因腹外斜肌放電實驗屬于有創性操作，增加實驗復雜度，因此腹壁撤退反射評分在動物實驗中的應用更為廣泛。腹壁撤退反射評分，是通過觀察受刺激后大鼠的腹肌收縮強度給出評分。本研究采用腹壁撤退反射評分，結果顯示模型組較正常組 AWＲ 評分顯著升高，說明模型組大鼠存在內臟高敏感。而溫腎健脾方和匹維溴銨zhi療可以顯著降低 AWＲ 評分，能夠緩解 IBS － D 大鼠的內臟敏感性。
曠場實驗( OFT) 又稱敞箱實驗，是評價實驗動物在新異環境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。在大鼠進入新環境后，會經歷緊張、興奮、探索、適應等心理過程，其活動表現為趨避性，好奇性及探索性的特點，因而 OFT 能夠反映大鼠進入空曠區域時的自我情緒，是評價嚙齒類實驗動物運動功能和焦慮狀態的經典方法。本研究顯示，模型組大鼠與正常組相比，直立次數、方格間穿行次數、穿越中央格次數、中央格停留時間均顯著降低，說明模型大鼠對新鮮事物的好奇程度降低，精神萎靡，活躍性降低，符合焦慮抑郁樣行為。與模型組相比，溫腎健脾方組與匹維溴銨組直立次數、方格間穿行次數、穿越中央格次數、中央格停留時間顯著升高。匹維溴銨組與溫腎健脾方組直立次數、方格間穿行次數、穿越中央格次數、中央格停留時間比較差異無統計學意義，說明溫腎健脾方和匹維溴銨具有一定的抗焦慮的作用。
