高架十字迷宮實驗方法

（elevated plus-maze test, EPM）

一.實驗原理

嚙齒類動物具有探究新環境的習性，但是又厭惡強光和開闊地。EPM就是利用嚙齒類動物對新異環境的探究行為和對高懸著的開臂的恐懼形成的矛盾沖突狀態，評價**的抗焦慮或致焦慮作用。EPM*初是由Montgomery在1955年的工作發展而來的。Pellow等人根據研究需要設計出了具有兩個開臂和兩個閉臂的十字迷宮，并將迷宮抬高借以增加動物進入開臂時的恐懼。高架十字迷宮是一個簡單、快速、結果重復性好的焦慮檢測模型，因此廣泛應用于抗焦慮**的研究與開發。

二.實驗裝置

    高架十字迷宮可以是木質結構，現在多為無味的塑料材質，顏色為黑色。上海欣軟信息科技有限公司大鼠高架十字迷宮包括50cm*10cm的兩個相對開臂（open arm）和兩個50cm*10*40cm的相對閉臂（closed arm），閉臂的上部是敞開的。迷宮中央有一10cm*10cm的開闊部，迷宮距離地面50cm高。迷宮上方安裝錄像監控器，以錄制動物在迷宮中的活動情況，以供日后分析使用。

三.實驗方法

1. 在實驗前一個星期，每天撫摸實驗動物1-5min，連續7天，借以消除實驗動物對實驗者的恐懼。

2. 將實驗動物放入迷宮中央區，頭朝開臂，并注意此后每只實驗動物均放在同一位置。同時開啟攝像監控器記錄5min內實驗動物開臂和閉臂的進入次數及進入各臂的時間。實驗過程中實驗者需距離迷宮1米的距離。

3. 記錄結束后將實驗動物放回飼養籠具內。同時清理迷宮，并用5%的醋酸水溶液或75%的酒精擦拭迷宮，借以消除動物氣味對后繼實驗動物的影響。

四.實驗數據

主要應用的實驗數據：                        

1.開臂進入次數百分比＝ 開臂進入次數/開臂進入次數＋閉臂進入次數                          

2.開臂滯留時間百分比＝ 開臂滯留時間/開臂滯留時間＋閉臂滯留時間

此兩指標作為評價焦慮的指標，通常這兩個指標高度相關。如果一個**增加動物對開臂的偏愛（即增加進入開臂的次數和在開臂內滯留時間），卻不改變入臂總次數和入臂總時間，也即開臂進入次數百分比和開臂滯留時間百分比升高，則認為該**具有抗焦慮的作用。相反一個**如果減少實驗動物對開臂的偏愛，而入臂總次數和入臂總時間不變，則認為該**具有致焦慮的作用。

五.注意事項

1. 為了提高大鼠入臂總次數，避免大鼠總是躲在閉臂中，通常在測試前先將大鼠放在開闊場地（open field）中適應5min后再放入迷宮。

2. 實驗前一周每天撫摸大鼠可以明顯減少大鼠對實驗者的恐懼感以及無關刺激對迷宮中大鼠的影響。

3. 盡管還沒有證據證實在**中不同時間對于實驗結果是否有明顯的影響。但是結合本人實驗的數據建議實驗動物檢測時間*好在上午9:00至下午15:00之間進行，如果有條件，且需要重復多次檢測，盡量在每天同一時間段檢測，以減少數據的波動。

4. 如果實驗中實驗動物從高架上跌落，*好將此動物剔除。現在的廠家生產的高架十字迷宮在開臂的周邊加了一個小邊。但這樣會改變焦慮的性質和降低抗焦慮**的敏感性。

5. 高架十字迷宮具有某些表觀信度，動物不愿探究迷宮開臂可能由于嚙齒類動物厭惡空曠區域和迷宮抬高引起的恐懼兩者共同作用的結果，目前尚不清楚這兩個因素哪個在致焦慮中占優勢。

6. 進入開臂的次數和在開臂停留的時間隨年齡的增長而減少。因此年齡較大的大鼠抗焦慮的效果較弱，但是對于安定類**的**反應增強。

7. 高架十字迷宮*初用于雄性大鼠，但是也可用于雌性大鼠。但是所測定的行為有所不同。用雄性大鼠主要測定焦慮，而用雌性大鼠主要測定活動性。

8. 除了大鼠，高架十字迷宮還用于小鼠，也有文獻報道用沙土鼠進行檢測，但是存在明顯品系差異。

9. 迷宮設計時對開臂的相對強光有所考慮。實驗中建議高架十字迷宮光源避免直接照射在高架十字迷宮上，也需要避免光線不均勻的照射在各臂上。可在高架十字迷宮周圍懸掛具有一定遮光性的布簾造成迷宮的周邊環境相對一致以及弱光照環境。