摘 　要 : 　目的 　 探討T迷宮實驗對焦慮模型小鼠行為的影響。方法 　 采用逐日遞增法 , 皮下注射啡形成小鼠依賴后 , 給予納絡酮催促 , 建立啡戒斷后焦慮模型。采用“三陰交”電針**和 T 迷宮行為學測試的方法 , 觀察針刺對啡戒斷后焦慮小鼠的焦慮情緒和腦內(nèi)去甲腎上腺素 ( N E) 含量變化的影響。 結果 　 1.針刺可使戒斷后焦慮模型小鼠在閉臂滯留時間縮短 ( P < 0.05) , 在開臂滯留時間延長 ( P < 0.05) ; 2.針刺能明顯降低模型組小鼠腦組織 N E ( P <0.01) 含量。 結論 　針刺可抑制啡戒斷后所致的焦慮癥狀 , 其抗焦慮效應可能與針刺調節(jié)焦慮模型小鼠腦內(nèi) N E 的釋放有關。

關鍵詞 :針刺療法 ; 啡戒斷 ; 焦慮 ; 去甲腎上腺素 ; T迷宮

　　焦慮是對**類物質 ( 如***等) 依賴的患者所反映的重要戒斷癥狀和稽延性癥狀 , 患者復吸和覓藥行為與焦慮呈正相關。臨床研究已經(jīng)證明 ,針刺不僅有較好的脫毒**效果 ,而且對啡戒斷后的焦慮也有良好的改善作用。但是 ,對于針刺的這一作用機理 , 目前卻未見研究報告發(fā)表。為認識針剌對啡戒斷后焦慮作用的機理 , 本實驗采用 T - 迷宮焦慮模型 , 觀察了針刺對小鼠啡依賴模型戒斷后焦慮癥狀的調整及腦內(nèi) N E 的影響 ,并對針刺抗啡戒斷后焦慮的神經(jīng)生物學機制 ,進行了初步探討。

1 　材料和方法

1.1 　材料

1.1.1 　動物選用昆明種小鼠 50 只 , 雄性 , 體重 18 g ± 1.2g 。( 動物及飼料均由成都中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供) 。動物在實驗前馴養(yǎng) 1 周 , 動物房溫度、濕度分別維持在 20 ℃、 70 %左右。

1.1.2 　藥品和試劑

鹽酸啡注射液 ( morp hine hydrochloride) 由沈陽**制藥廠提供 ,批號 930503 。鹽酸納絡酮注射液 ( naloxone ,NL X ) ,由益橋 ( 湖南) 制藥有限公司提供 , 批號 950920 。N E 標準品 :Sigma Chemical Co 。

1.1.3 　儀器與設備

T - 迷宮 , 參照文獻制作 ，由上海欣軟信息科技有限公司提供; 熒光分光光度計( RF - 510 型 ,日本島津) ; 韓氏電針**儀。T迷宮實驗對焦慮模型小鼠行為的影響

1.2 　方法

1.2.1 小鼠啡依賴模型的建立

小鼠按照隨機分組的原則 ,分為完全空白組 ( 簡稱空白組) ; 迷宮空白組 ( 簡稱迷空組) ; 模型組 ; 模型加電針組 ( 簡稱模針組) ; 單純電針組 ( 簡稱單針組) 。每組 10 只。

A. 空白組 : 除每天在相同的時間進行與其他組相同的方法固定外 ,不做任何處理。

B. 迷空組 : 每天除進行和空白組相同的處理外 ,再加迷宮實驗。

C. 模型組 : 造模方法參照文獻進行 : 以小鼠熱板法鎮(zhèn)痛 ED50 ,即啡 2.95mg/ kg 為基礎 ,按照逐日遞增原則進行。于第 12 次給藥后 3h , 腹腔注射納絡酮 20mg/ kg 后 ,立即將小鼠置于 3000 mL 燒杯內(nèi) ,觀察注射納絡酮 10 min 內(nèi)小鼠的跳躍反應。通過小鼠跳躍實驗被確認為**成癮者 , 再接受迷宮試驗 ,符合焦慮標準者即為啡戒斷焦慮模型成功。隨后 6 天只進行與針刺組相同的固定和迷宮實驗。

D. 模針組 : 在啡戒斷后焦慮模型基礎上 , 進行電針** ; 電針從催癮后當天開始進行。取三陰交穴。穴位根據(jù)《中國獸醫(yī)針灸學》及《實驗針灸學》并結合人體進行參照定位。取穴定位之后 , 以掀針刺于雙側三陰交 , 接韓氏電針**儀 , 頻率 2 ～100HZ ,電流 0.5～2 mA ,電壓 2～4 V ,以見到小鼠下肢輕微抖動為度。每日** 1 次 , 每次** 15 min 。連續(xù)** 6 天 ,并參予迷宮實驗。

E. 單針組 : 不造模 , 只給予同模針組相同的固定、針刺處理和迷宮實驗。各組動物在第 6 天迷宮實驗后 ,立即斷頭處死 ,迅速取腦 , 置于 - 30 ℃冰箱冷凍待測。用熒光法檢測 N E 的含量。

1.2.2 　 T - 迷宮實驗

具體方法為 : 實驗前將每只小鼠放入一個 60 ×60 × 35cm 宮體中 , 讓其熟悉環(huán)境 5 min 后 , 先置于迷宮的閉臂封閉端 ,頭朝壁 ,觀察者距離迷宮中心1 m 。記錄實驗期 ( 3 min) 內(nèi)小鼠在閉臂滯留時間(以四肢全部出臂為準) , 閉臂共測試 3 次。再將小鼠置于開臂的頂端 , 記錄實驗期 ( 3min) 內(nèi)小鼠在開臂滯留的時間 ( 以四肢全部出臂為準) , 開臂測試 1次。其中 ,在每次測試結束后 ,均將小鼠放回塑料盒停留 30 s 后再進行下一次測試。若 3 min 結束 , 小鼠仍在閉臂和開臂滯留 , 則將小鼠取出 , 計為 3min 。

測試時間為 : 注射納絡酮催癮后當天 ( 電針前) ,**第 3 天和**結束時 , 共進行 3 次迷宮行為學測試。實驗在安靜環(huán)境下進行。

1.2.3 　實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

實驗結果數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標準差 ( … x ± s) 表示 , 采用 SPSS 10.0 統(tǒng)計軟件包進行單因素方差分析、 q檢驗 ( Newman - Keuls 法) 。

2 　結果

2.1 　電針對啡戒斷后焦慮小鼠行為學影響

　　從表 1 得知 , 納絡酮催癮后 , 模型組和模針組小鼠在第 3 次測試時其閉臂滯留時間長于迷空組和單針組 ( P < 0.05) , 表明焦慮模型成功 , 接受造模的模型組和模針組小鼠之差異 , 無統(tǒng)計學意義 ( P <0.05) , 具有良好的可比性。由表 2 可知 , 接受**3 天后 , 模針組小鼠在第 3 次閉臂滯留時間短于模

型組 ( P < 0.05 ) , 在開臂的時間長于模型組 ( P <0.05) 。單針組與迷空組相比 , 也獲得同樣結果 ( P< 0.05) , 提示針刺具有抗焦慮的**效應。從表 3得知 , 在接受** 6 天后 , 模針組小鼠在閉臂滯留時間短于模型組 ( P < 0.01 ) , 在開臂的時間長于模型組 ( P < 0.01) 。單針組和迷空組相比均比模型組小

鼠在閉臂滯留時間短 ( P < 0.01 , P < 0.05 ) ; 提示針刺抗焦慮的**效應 , 隨著**時間的增加而繼續(xù)維持。

2.2 　針刺對啡戒斷后焦慮小鼠腦組織 N E 含量的影響。

由表 4 可知 , 模型組小鼠腦內(nèi) N E 含量高于空白組、模針組、單針組 ( P < 0.01 ) 和迷空組 ( P <0.05) ,模針組小鼠腦內(nèi) N E 含量低于模型組 ( P <0.01) , 并接近于空白組 ( P > 0.05) 。 迷空組小鼠腦內(nèi)的 N E 含量高于空白組、單針組和模針組 ( P <0.05) 。

3 　討論

近年來 , 在高架十字迷宮模型基礎上發(fā)展起來的新型 T - 迷宮焦慮模型 , 為國際公認和常用的一種小鼠焦慮模型。T - 迷宮小鼠模型 , 它以動物自發(fā)行為為基礎 ,動物不需要特殊訓練 ,利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼心理 , 形成動物的矛盾行為 , 以動物滯留開臂和閉臂的時間長短來反應動物的焦慮狀態(tài) , 具有與臨床更為接近的優(yōu)勢。本實驗以逐日遞增法形成嗎依賴小鼠模型 ,腹腔注射納絡酮催促戒斷后 ,采用 T - 迷宮篩選焦慮模型小鼠。迷宮實驗結果表明 , 啡戒斷后小鼠滯留在閉臂的時間長于單針組與迷空組 ( P <0.05) , 說明戒斷后小鼠已呈現(xiàn)出焦慮狀態(tài) , 提示本實驗造模成功。

在本實驗中 , 觀察到模型組小鼠在迷宮閉臂滯留時間長于模針組小鼠 , 在開臂滯留時間則短于模針組小鼠 ( P < 0.01 ) , 說明電針具有抗啡戒斷后焦慮的**效應。

劉東亮等認為 , 吸食毒濁之氣 , 先為吸而犯肺 ,食而入胃 ,后則郁閉心腦 ,傷及脾、肝、腎、三焦及腸 ,致使五臟閉結 , 毒聚臟腑。楊氏則認為 , 長期吸毒會導致陰液虧損 ,元氣暗耗 ,氣血虛衰 ,臟腑俱損 ,一旦斷煙 , 則諸癥皆起。總之 , 若肝、脾、腎陰液不足 ,氣血衰少 ,腦髓失去濡養(yǎng) ,導致心神不定 ,心失濡養(yǎng) ,而發(fā)生焦慮。三陰交穴首載于《針灸甲乙經(jīng)》 ,為足太陰脾經(jīng)之穴 , 于足太陰、足厥陰、足少陰三陰經(jīng)交會之處 ,具有調肝補脾滋腎之功 ,本實驗結果表明 ,三陰交穴具有抗啡戒斷后焦慮的**效應。

目前學術界已公認 : 啡、***戒斷后焦慮情緒的產(chǎn)生 ,與**多種神經(jīng)系統(tǒng)功能異常變化有關。其中 : **去甲腎上腺能神經(jīng)元主要接受邊緣系統(tǒng)藍斑區(qū) N E 核的支配 , 使突觸后受體包括α 1 、 α 2 、 β 1 、β 2 腎上腺受體釋放 N E ,以及藍斑核的原癌基因 c -fos 表達明顯增加 , 從而誘發(fā)啡戒斷后焦慮的產(chǎn)生。此外 ,N E 系統(tǒng)參予**戒斷后的焦慮情緒的機制 ,還可能通過與多巴胺 ( DA) 和 5 - 羥色胺 ( 5 -HT) 等系統(tǒng)互相調節(jié)作用而實現(xiàn)。在本實驗中 , 模型組小鼠腦組織 N E 含量高于其余各組 , 其行為學表現(xiàn)為焦慮狀態(tài) , 提示 N E 可能直接參與焦慮狀態(tài)的產(chǎn)生。模針組小鼠腦內(nèi) N E 水平低于模型組 , 并接近正常組小鼠 , 說明針刺不僅能夠對啡戒斷后焦慮 ,從行為學方面產(chǎn)生**效應 ,而且還可能影響** N E 含量 ,降低** N E 神經(jīng)元的興奮性 ,抑制其興奮傳導過程 , 從而呈現(xiàn)抗焦慮效應。但這一作用機理與其他神經(jīng)遞質之間的關聯(lián)如何 , 還有待于進一步研究。