觀察運用電針**對阿爾茨海默病模型大鼠行為學影響的實驗研究
觀察運用電針**對阿爾茨海默病模型大鼠行為學影響的實驗研究
【摘要】 目的 通過針刺的方法**阿爾茨海默病模型大鼠，觀察對其學習和記憶的改善效果。方法 通過給大鼠灌服D-半乳糖制劑，造成大鼠阿爾茨海默病模型。分別設立正常對照組、模型對照組、**對照組、普通針刺對照組、電針對照組。正常對照組、模型對照組只給予相同劑量的生理鹽水灌服，**對照組給予哈伯因混懸液灌服**，普通針刺組采用針刺“百會”、“神庭”、“腎俞”、“太溪”、“足三里”的方法進行**，電針組采用針刺“百會”、“神庭”、“腎俞”、“太溪”、“足三里”穴，并在些基礎上聯接電針進行**。以10d為1個療程，共**3個療程。通過大鼠跳臺試驗來檢測大鼠的學習和記憶能力，并對大鼠大腦海馬CAI區的tau蛋白含量進行觀察。結果 造模后，正常對照組大鼠的記憶逃避潛伏期時間明顯少于模型對照組(P <0.05)，**結束后**對照組、普通針刺組、電針組的逃避潛伏時間短于模型對照組(P <0.05)。電針組的療效優于普通針刺組和**對照組(P <0.05)。而**后，海馬CAI區的 P-tau蛋白表達**組都低于模型組，且電針組的效果要優于**對照組和普通針刺組(P <0.05)。
【關鍵詞】 針刺；阿爾茨海默病；記憶能力
隨著年齡的增大，老年人中癡呆的發生率逐漸增高，其中以阿爾茨海默病(又叫老年性癡呆)*為多見。這是一種**神經系統(大腦)神經細胞的脫髓鞘式退變。臨床上主要表現為記憶能力、判斷能力、學習能力以及行動能力、生活自理能力普遍下降，給患者生活質量和家庭生活都帶來了不利的影響。而目前尚未有特效**和**方法問世，而中醫的針灸**在臨床上卻收到了較為明顯的改善效果。而其中的作用機理卻未被揭示，本文從神經行為學和組織化學的層面作了觀察，期望為針刺**該病的機理提供佐證。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 主要器材：采用由上海欣軟信息科技有限公司生產的Morris水迷宮，為改良型水迷宮，其跳臺可以定時出現。由日本株式會社生產的B50型天平，由美國Sigma生物技術有限公司提供的測試AD P-tau蛋白的原位原位雜交試劑盒，中國江蘇華佗醫療設備廠出產的“長城牌”電針儀。
1.1.2 主要應用試劑：誘發AD模型所用D-半乳糖由北京貝瑞和康生物技術有限公司生產，**對照組所用**為河南竹林眾生制藥有限公司生產的哈伯因懸服液。
1.2 動物篩選
將所有購自黑龍江中醫藥大學動物實驗中心的Wistar大鼠放入水迷宮中，進行適應性的游泳訓練，記錄其游泳距離，學習逃避潛伏期和學習錯誤次數，訓練1周。然后將游泳能力障礙，學習記憶能力先天不足的大鼠予以淘汰，*后選取符合實驗條件的50只大鼠進入*后實驗程序。
1.3 模型制備方法
將準備造模的大鼠放入相同環境中進行適應性喂養1周，保持充足的光線、水分和食物。然后按每只大鼠200mg/kg體重的劑量向齊腹部注射D-半乳糖，1次/d注射，共持續6周時間。然后將所有造模大鼠編號，按隨機原則分為模型對照組10只、**對照組10只、普通針刺**組10只、電針組10只。取正常大鼠10只作為正常對照組。
1.4 **方法
**開始后，正常對照組、模型對照組均給予每日捆綁30min，并灌服與**對照組灌服**相同量的生理鹽水；**對照組則每日灌服哈伯因懸服液2ml(17μg)；普通針刺組則用“華佗牌”30號針灸針針刺大鼠“百會”、“神庭”、“腎俞”、“太溪”、“后三里”穴，得氣后行針2min，留針30min；電針組則在普通針刺組的基礎上加用“長城牌”電針儀，采用疏密波刺激以上穴位，時間30min。“百會”穴在頭頂正中線中點頭骨中央；“神庭”穴在頭頂正中線前端；“腎俞”穴在后正中線上，于**腰椎棘突下旁開一寸；“太溪”穴在后肢踝部外側后方凹陷處；“后三里”在大鼠后肢膝部外側前下方。所有大鼠**時間為6周，**1次/d。
1.5 測試和取材觀察方法
跳臺試驗。Morris水迷宮的游泳池中有一塊橡膠平臺，離水面有1cm。將大鼠放入水池中開始記時，當大鼠通過游泳尋找到水下的平臺時記為學習逃避潛伏期。24h后再重復以上試驗，第2次所需時間為記憶逃避潛伏期。以此作為大鼠的學習和記憶能力的反應指標。分別在造模前第1周、**前第7周、**后第13周3個時間點進行大鼠學習逃避潛伏期、記憶逃避潛伏期的測試。水迷宮試驗結束后，將大鼠進行麻醉，接著通過腦過量灌注致其死亡。將大鼠頭骨切開取出大鼠組織，放入深度為4%的1/1000 DEPC溶液中保存，再使用多聚甲醛予以固定待檢。將固定的腦組織由額極向枕極順序平均分成五份，取出第2份腦組織放入24℃的水中用酒精進行梯度脫水處理。其順序是70%乙醇→80%乙醇→95%乙醇→100%乙醇一度→100%乙醇二度→100%乙醇三度，然后染色切片并用二甲苯使組織透明。用AD P-tau蛋白原位雜交試劑盒進行tau 蛋白過度磷酸化陽性檢測。細胞中出現的棕黃色顆粒者即為過度磷酸化tau蛋白表達。*后對tau蛋白陽性表達數進行統計。
1.6 統計學處理
用電子計算機編輯圖像和表格。所有數據用SPSS13.0軟件包進行統計。計量資料的表示方式為平均數±標準差，用方差來分析組與組之間的均數對比，以P <0.05為衡量標準。在對陽性細胞數的觀察時每個載玻片取3個視野，計取其平均顆粒數。
2、討論
許多研究都充分地證實，人對空間結構的學習能力和記憶能力更多的建立在大腦組織 中的海馬神經元，而阿爾茨海默癥則是對該區的腦組織造成持續性的神經細胞的退行性改變而使空間學習和記憶能力下降。學習和記憶能力作為癡呆患者智力指標的重要考查要點，具有金指標的指示地位，所以在實驗中我們把大鼠的學習、記憶逃避潛伏期作為觀察指標。以上結果清楚表明，經過腹腔灌服D-半乳糖后，AD模型大鼠的空間學習和記憶能力已經是明顯地退化了，說明D-半乳糖的吸收可以造成大鼠大腦細胞退行性改變，tau蛋白等負面物質的產生，使大腦功能退化。然而通過針刺后，大鼠在水迷宮的表現令人欣慰，雖然在**的6周期間，大鼠的腦細胞仍然處于退變狀態，但潛伏時間并沒有下降得很快，甚至電針組還有所提升。實驗證實，針刺**能夠和西藥一樣起到改善腦部功能的作用。經過**，大鼠在學習和記憶能力都較**前有回升。當然，由于AD不僅是功能，也有一部分器質上的改變，所以針刺只能在一定范圍內起到**恢復的作用，而不能使AD大鼠的記憶功能完全恢復；但是實驗也顯示，針刺配合電針相對于普通針刺更有效果，說明如果對針刺手法和方式進行改進，能夠進一步擴大療效，使**后效果無限接近于正常。從生物化學層面分析，tau蛋白過量產生，對腦功能是一種負面影響，而西藥組和針刺組都不同程度的達到抑制該蛋白產生的目的。而電針更是有效地降低了tau蛋白的表達率，一則說明了tau的確對大鼠記憶系統造成紊亂，另一方面也提示如果能降低tau蛋白的表達，那么就能一定程度地改善大腦功能。
