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八臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法


八臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法

八臂迷宮(radial arm maze)實(shí)驗(yàn)也是*為常用的評(píng)價(jià)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的模型之一,由Olton等人于20世紀(jì)70年代中期建立。其基本依據(jù)是,控制進(jìn)食的動(dòng)物受食物的驅(qū)使對(duì)迷宮各臂進(jìn)行探究;經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的訓(xùn)練,動(dòng)物可記住食物在迷宮中的空間位置。該方法可同時(shí)測(cè)定動(dòng)物的工作記憶(working memory)和參考記憶(reference memory)。所用動(dòng)物包括大鼠、小鼠和鴿子。這一模型對(duì)腦區(qū)毀損和多種**均很敏感。后者包括乙醇、東###(抗膽堿能藥)和MK-801(NMDA受體拮抗劑)等。

  • (一)   實(shí)驗(yàn)設(shè)備 

 

實(shí)驗(yàn)多數(shù)采用八臂放射迷宮,也有采用十二臂或者二十四臂迷宮。這里介紹上海欣軟信息科技有限公司(jmqy66.com)生產(chǎn)的八臂迷宮。每個(gè)臂長(zhǎng)41.9cm,寬11.4cm,高10.1cm;其上有一透明蓋,兩側(cè)各有兩個(gè)相對(duì)的光電管。迷宮中央八角形區(qū)的直徑為27.4cm;上有一透明頂蓋。中央?yún)^(qū)通往各臂的入口處有一活動(dòng)門,用來(lái)對(duì)動(dòng)物的出入臂進(jìn)行控制。迷宮與計(jì)算機(jī)相聯(lián)。也可用攝像跟蹤系統(tǒng)(video tracking system)取代光電管來(lái)記錄動(dòng)物在迷宮內(nèi)的活動(dòng)行為。放置迷宮的房間內(nèi)有一些外部暗示(extramaze cues)。動(dòng)物在迷宮內(nèi)可以看見這些暗示,并借此進(jìn)行空間定位。實(shí)驗(yàn)用大鼠或小鼠進(jìn)行。

  • (二)實(shí)驗(yàn)方法

1.動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境1周后,稱重,禁食24小時(shí)。此后每天訓(xùn)練結(jié)束后限制性地給予正常食料(據(jù)體重不同,大鼠16-20g,小鼠2-3g),以使體重保持在正常進(jìn)食大鼠的80%~85%。

2.**天,迷宮各臂及中央?yún)^(qū)分撒著食物顆粒(每只4~5粒,直徑約3~4mm)。然后,同時(shí)將4只動(dòng)物置于迷宮中央(通往各臂的門打開)。讓其自由攝食、探究10min。

3.第三天,重復(fù)**天的訓(xùn)練。這一過(guò)程讓動(dòng)物在沒有很強(qiáng)的應(yīng)激條件下熟悉迷宮環(huán)境。

4.第四天起,動(dòng)物單個(gè)進(jìn)行訓(xùn)練:在每個(gè)臂靠近外端食盒處各放一顆食粒,讓動(dòng)物自由攝食。食粒吃完或10min后將動(dòng)物取出。

5.第五天,將食物放在食盒內(nèi),重復(fù)前**的訓(xùn)練,**2次。

6.第六天以后,隨機(jī)選4個(gè)臂,每個(gè)臂放一顆食粒;各臂門關(guān)閉,將動(dòng)物放在迷宮中央;30s后,臂門打開,讓動(dòng)物在迷宮中自由活動(dòng)并攝取食粒,直到動(dòng)物吃完所有4個(gè)臂的食粒。如經(jīng)10min食粒仍未吃完,則實(shí)驗(yàn)終止。每天訓(xùn)練兩次,其間間隔1h以上。

記錄以下4個(gè)指標(biāo):1工作記憶錯(cuò)誤(working memory errors),即在同一次訓(xùn)練中動(dòng)物再次進(jìn)入已經(jīng)吃過(guò)食粒的臂;2參考記憶錯(cuò)誤(reference memory errors ),即動(dòng)物進(jìn)入不曾放過(guò)食粒的臂;3總的入臂次數(shù);4測(cè)試時(shí)間,即動(dòng)物吃完所有食粒所花的時(shí)間。此外,計(jì)算機(jī)還可記錄動(dòng)物在放射臂內(nèi)及中央?yún)^(qū)的活動(dòng)情況,包括運(yùn)動(dòng)距離和運(yùn)動(dòng)時(shí)間等。連續(xù)5次訓(xùn)練的工作記憶錯(cuò)誤為零、參考記憶錯(cuò)誤不超過(guò)1次時(shí),可以開始**測(cè)試或腦內(nèi)核團(tuán)結(jié)構(gòu)毀損實(shí)驗(yàn)。一般先給溶劑(如生理鹽水),再給削弱記憶的**(如東~~~~MK-801等),然后加用增強(qiáng)記憶的**,劑量由低到高。

  • (三)        計(jì)算與數(shù)據(jù)分析 

八臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法用兩個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)動(dòng)物的記憶,即工作記憶錯(cuò)誤頻率(frequency  of  working  memory  errors) 和參考記憶錯(cuò)誤頻率(frequency of reference memory errors) ,分別等于工作記憶錯(cuò)誤或參考記憶錯(cuò)誤與總的入臂次數(shù)的比率。用這兩個(gè)指標(biāo)分別評(píng)價(jià)工作記憶與參考記憶。同時(shí),計(jì)算平均探究時(shí)間(average exploration time),即測(cè)試時(shí)間與總的入臂次數(shù)之比,為評(píng)價(jià)一般運(yùn)動(dòng)活性的指標(biāo)。根據(jù)毀損的腦區(qū)結(jié)構(gòu)或所給削弱記憶的**的不同,工作記憶錯(cuò)誤頻率和/或參考記憶錯(cuò)誤頻率顯著增高,記憶增強(qiáng)**或**可使這種錯(cuò)誤頻率降低。

  • 注意事項(xiàng)

1.  小鼠放射迷宮設(shè)備和實(shí)驗(yàn)程序與大鼠類似,但迷宮規(guī)格應(yīng)比大鼠迷宮小1/4~1/2,以免增加小鼠行為操作難度。

2.  本實(shí)驗(yàn)也可只用來(lái)測(cè)定工作記憶。方法中**不同的是,在所有放射臂均放置食粒,而不是只選4個(gè)臂放置食粒。

3.  慢性應(yīng)激對(duì)動(dòng)物的迷宮操作可產(chǎn)生影響,且存在性別差異。經(jīng)過(guò)慢性應(yīng)激以后,雄性大鼠記憶力減弱,表現(xiàn)為記憶錯(cuò)誤頻率增加;雄性大鼠的空間記憶反而增強(qiáng),表現(xiàn)為錯(cuò)誤頻率減少。

4.  即使在限制進(jìn)食條件下,也應(yīng)讓大鼠體重每周增加5g,以免動(dòng)物因營(yíng)養(yǎng)**而患病。剔除身體狀態(tài)**的動(dòng)物。

5.  迷宮周圍的任何一件物品均可被動(dòng)物用來(lái)作為空間定為的標(biāo)志。去除或移動(dòng)這些標(biāo)志可能使動(dòng)物操作困難并降低迷宮臂選擇的準(zhǔn)確性。

6.  八臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌詫m放射臂的數(shù)目可不同,包括8、16、24、32、40和48臂迷宮。迷宮臂越少要求動(dòng)物記住探究過(guò)的臂也越小,動(dòng)物的行為操作就越簡(jiǎn)單。增加臂的數(shù)目一方面增加了對(duì)動(dòng)物空間記憶的要求,另一方面也引入了更多的、有必要考慮的干擾因素(例如過(guò)去的迷宮學(xué)習(xí)對(duì)目前所測(cè)記憶的影響)。所以,通常使用8臂放射迷宮,既可減少不必要的、過(guò)多臂的干擾,又可縮短訓(xùn)練和測(cè)試所花的時(shí)間。

7.  所用食物通常為小塊的、帶巧克力味(動(dòng)物*喜歡的味道之一)或甜味的早餐圈(每塊10mg);也可用液體食物(如巧克力奶或水)。后者對(duì)于測(cè)試某些影響動(dòng)物對(duì)固體食物吞咽的**(如東###)尤為實(shí)用。

8.  影響動(dòng)物迷宮操作主要有兩大因素:對(duì)迷宮或觀察者的恐懼與動(dòng)物探究習(xí)性和已知放在迷宮臂內(nèi)食物的驅(qū)使。恐懼因素過(guò)強(qiáng)會(huì)阻止動(dòng)物的迷宮操作,使動(dòng)物始終停留在迷宮的某一個(gè)地方而不去探究。缺乏對(duì)食物的渴求也會(huì)產(chǎn)生類似結(jié)果,增加對(duì)動(dòng)物的撫摸,必要時(shí)加高迷宮臂的側(cè)墻,有助于減少動(dòng)物的恐懼。如食物的驅(qū)使作用不足,可減少食物量,但必須同時(shí)監(jiān)測(cè)體重和一般身體狀況。通常大鼠體重不應(yīng)低于禁食前的80%;對(duì)多數(shù)大鼠,體重降低15%即可。

9.  與水迷宮不同,放射臂迷宮適合反復(fù)測(cè)試或長(zhǎng)期記憶的測(cè)試。一般認(rèn)為,工作記憶代表短期記憶,參考記憶代表長(zhǎng)期記憶。

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